离心柱负压收集盒 KBox
硅胶膜离心柱法是一种分离和纯化DNA的方法,适用于从不同来源的生物样品中提取DNA,如血液、细胞、组织、植物等,KBox是适用于负压法洗脱DNA的一个废液收集装置
硅胶膜离心柱法提取特点:
3、提取浓度效果好,浓度高。
裂解及消化
将新鲜血液转移到离心管中,加入蛋白酶K裂解液促使细胞破碎,核酸与蛋白质分离。再加入消化缓冲液,使蛋白质变性、消化,暴露DNA。
孵育
恒温金属浴70度孵育10分钟,提供适宜的温度,有助于蛋白质消化和分解。
沉淀
加入无水乙醇,它可以任意比与水互溶,夺取DNA周围的水分子,沉淀DNA。
吸附
转移到吸附柱以后经过高速离心或者负压法的操作,由于硅胶模对核酸有较强的亲和力和吸附力,核酸会特异地吸附到硅胶膜上。
去杂质
加入漂洗液,硅胶模对蛋白质、多糖、脂类基本不吸附,在高速离心以后被甩出离心柱。
干燥及洗脱
晾干5分钟,之后加入洗脱液,把硅胶模上吸附的核酸洗脱下来,在高速离心之后就可以得到纯化的核酸溶液。
硅胶膜离心吸附柱用负压法提取DNA的过程主要包括以下几个步骤:
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样本裂解。将待处理样本(如血液、组织等)进行裂解,并加入裂解液,使细胞和核酸释放。
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加入絮凝剂。加入适量的絮凝剂,使核酸分子与其他物质分离。
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加入离心盒。将裂解样品和絮凝剂混合后,接着加入离心盒。
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加入硅胶膜离心吸附柱。将硅胶膜离心吸附柱放置于离心盒内,尽量保持柱立直。
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加入洗涤液。将洗涤液加入离心盒中,然后轻轻离心。洗涤液中的化学试剂能够较好地去除掉杂质,使核酸分子得以附着于硅胶膜上。
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加入洗脱液。将洗脱液加入离心盒中,稍作混匀。洗脱液可以使DNA分子从硅胶膜上脱附下来。
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收集DNA。通过负压法,将洗脱液和DNA分子收集到一个小管中。
以上就是硅胶膜离心吸附柱用负压法提取DNA的主要步骤。在实际操作中,需要谨慎操作,严格控制pH值、温度等因素,才能提取到高质量的DNA样品。