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KBox

离心柱负压收集盒 KBox

硅胶膜离心柱法是一种分离和纯化DNA的方法,适用于从不同来源的生物样品中提取DNA,如血液、细胞、组织、植物等,KBox是适用于负压法洗脱DNA的一个废液收集装置

硅胶膜离心柱法提取特点:

 
 
 
1、实验流程操作简单
2、价格低廉

3、提取浓度效果好,浓度高。

 

硅胶模吸附原理:硅胶膜表面的硅醇基团呈弱酸性,其水化后带负电。当溶液中存在一定浓度的阳离子后,形成的阳离子桥能够中和DNA和硅醇基团之间的表面负电荷,从而使DNA牢固地吸附在硅胶膜表面。反之,处于低盐水溶液状态下时,由于硅胶膜的硅醇基团与DNA磷酸基团之间的静电排斥,硅胶膜释放DNA。
硅胶模离心柱法提取流程(血液样本):
 

裂解及消化

将新鲜血液转移到离心管中,加入蛋白酶K裂解液促使细胞破碎,核酸与蛋白质分离。再加入消化缓冲液,使蛋白质变性、消化,暴露DNA。

 

孵育

恒温金属浴70度孵育10分钟,提供适宜的温度,有助于蛋白质消化和分解。

 

沉淀

加入无水乙醇,它可以任意比与水互溶,夺取DNA周围的水分子,沉淀DNA。

 

吸附

转移到吸附柱以后经过高速离心或者负压法的操作,由于硅胶模对核酸有较强的亲和力和吸附力,核酸会特异地吸附到硅胶膜上。

 

去杂质

加入漂洗液,硅胶模对蛋白质、多糖、脂类基本不吸附,在高速离心以后被甩出离心柱。

 

干燥及洗脱

晾干5分钟,之后加入洗脱液,把硅胶模上吸附的核酸洗脱下来,在高速离心之后就可以得到纯化的核酸溶液。

硅胶膜离心吸附柱用负压法提取DNA的过程主要包括以下几个步骤:

  1. 样本裂解。将待处理样本(如血液、组织等)进行裂解,并加入裂解液,使细胞和核酸释放。

  2. 加入絮凝剂。加入适量的絮凝剂,使核酸分子与其他物质分离。

  3. 加入离心盒。将裂解样品和絮凝剂混合后,接着加入离心盒。

  4. 加入硅胶膜离心吸附柱。将硅胶膜离心吸附柱放置于离心盒内,尽量保持柱立直。

  5. 加入洗涤液。将洗涤液加入离心盒中,然后轻轻离心。洗涤液中的化学试剂能够较好地去除掉杂质,使核酸分子得以附着于硅胶膜上。

  6. 加入洗脱液。将洗脱液加入离心盒中,稍作混匀。洗脱液可以使DNA分子从硅胶膜上脱附下来。

  7. 收集DNA。通过负压法,将洗脱液和DNA分子收集到一个小管中。

以上就是硅胶膜离心吸附柱用负压法提取DNA的主要步骤。在实际操作中,需要谨慎操作,严格控制pH值、温度等因素,才能提取到高质量的DNA样品。

 

 

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